Với sự phát triển công nghệ và sự nổi lên của các liệu pháp hormone, thử nghiệm hormone trở nên quan trọng hơn bao giờ hết trong nghiên cứu lâm sàng. Nổi bật là mối quan tâm đến sự hợp nhất các phương pháp phân tích steroid bằng cách kết hợp các kỹ thuật khác nhau để phân tích nhiều hợp chất steroid trên cùng một phương pháp. Phương pháp sắc ký lỏng nhanh và chuẩn bị mẫu dựa trên các nhóm chức đặc trưng giúp tăng hiệu quả và năng suất phân tích. Huyết thanh là mẫu được ưu tiên dùng trong thử nghiệm hormone cho các ứng dụng lâm sàng.
Phenomenex luôn đi đầu trong phân tích steroid với các sản phẩm và ứng dụng hỗ trợ nghiên cứu lâm sàng. Hình 1 thể hiện độ chọn lọc trên 19 hợp chất steroid, phân tích trong 8 phút với cột Core-shell C18:
Hình 1. Các đồng phân của Steroid được phân tách hoàn toàn trong 8 phút với cột Kinetex C18
Trong nghiên cứu lâm sàng, lượng huyết thanh cần sử dụng trong phân tích ngày càng ít. Tuy nhiên, các phương pháp chiết vẫn yêu cầu độ thu hồi cao để đạt được độ nhạy cần thiết. Nhiều nghiên cứu yêu cầu giới hạn phát hiện (LOD) rất thấp. Nghiên cứu này mô tả hai phương pháp làm sạch mẫu đối với mẫu huyết thanh, chiết pha rắn (Solid phase extraction – SPE) và chiết lỏng-lỏng trên pha rắn (Supported liquid extraction – SLE). Mỗi phương pháp đều có những ưu điểm riêng. SLE cho kết quả mẫu rất sạch với các bước chiết và hiệu chỉnh phương pháp tối thiểu. SPE cho phép sửa đổi các bước rửa và rửa giải để loại bỏ có chọn lọc các chất cản trở và rửa giải các hợp chất mong muốn, nhưng đòi hỏi phải thực hiện nhiều bước chiết và hiệu chỉnh hơn SLE.
Hình 2. Phương pháp SPE với 19 hợp chất phân tích steroid
Hình 3. Phương pháp SLE với 19 hợp chất phân tích steroid
Thông thường, các phòng thí nghiệm muốn có một phương pháp chọn lọc hoặc nhạy cảm hơn với một nhóm chất phân tích steroid cụ thể. Ngoài các phương pháp chuẩn bị mẫu và sắc ký lỏng tối ưu cho phân tích 19 chất phân tích steroid, Phenomenex còn cung cấp các phương pháp chuẩn bị mẫu và sắc ký lỏng tốt nhất với các nhóm hormone cụ thể như estrogen, androgen và cortisol. Ví dụ như sử dụng cột biphenyl và các điều kiện sắc ký khác nhau sẽ phân tách testosterone khỏi epitestosterone (Hình 4).
Hình 4. Phân tách Testosterone và Epitestosterone bằng LC-MS/MS
Estrogen và các dẫn xuất được chiết xuất bằng phương pháp chiết SLE với cột Novum Pro cho độ nhạy tốt hơn với thử nghiệm ở nồng độ thấp bằng phép đo phổ khối
Hình 5. Điều kiện chuẩn bị mẫu Estrogene và các dẫn xuất
Hình 6. Kết quả phân tích mẫu Estrogen và các dẫn xuất
SLE cũng là lựa chọn tốt với glucocorticoid. Mỗi nhóm có cách chuẩn bị mẫu và điều kiện sắc ký riêng.
