Bài viết dựa trên nghiên cứu của Roxana Eggleston-Rangel, Ryan Splitstone và Tiến sĩ Jason Anspach
Micro LC là các cột có đường kính trong khoảng 0.3 – 0.5 mm và có pha tĩnh tương đương với các loại cột sắc ký truyền thống. Trong sắc ký lỏng, các điều kiện phân tích tác động đến hiệu năng và độ chọn lọc của phép tách. Để tối ưu hóa điều kiện phân tích, một phương pháp thông dụng với cột micro LC là sử dụng chế độ tiêm “bẫy-rửa”. Chế độ tiêm “bẫy-rửa” giúp rút ngắn thời gian tiêm và bảo vệ cột sắc ký khỏi tạp có trong mẫu. Bẫy micro LC có thể ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi và chất phân tích trong mẫu tùy thuộc vào pha tĩnh được sử dụng.
Trong bài báo này, chúng tôi khảo sát sự ảnh hưởng của các cột micro LC với pha tĩnh khác nhau đến hiệu năng, hiệu suất thu hồi và độ chọn lọc. Chúng tôi so sánh các cột micro LC cùng kích thước 50 x 0.3 mm với ba loại pha tĩnh khác nhau: Kinetex® XB-C18, Luna® Omega PS C18 và Luna Omega Polar C18.
Phương pháp so sánh dựa trên mẫu chứa hỗn hợp 20 đồng vị peptide với cùng điều kiện pha động và được phân tích trên máy SCIEX® 5500 QTRAP®, đầu dò MS/MS. Kết quả cho thấy sự khác biệt về hiệu năng và hiệu suất thu hồi khi sử dụng các cột micro LC khác nhau kết hợp với các bẫy chọn lọc tương ứng. Điều chỉnh sự kết hợp giữa cột và bẫy chọn lọc là phương pháp hiệu quả để tối ưu khả năng phân tách của cột micro LC.
Trong hình 2, cột Kinetex XB-C18 kết hợp với bẫy MicroTrap Polar mang lại hiệu suất thu hồi cao nhất. Sự khác biệt về hiệu suất thu hồi khi kết hợp các cột và bẫy khác nhau được thể hiện qua hình 3-4. Sự khác biệt này cho thấy tầm quan trọng của việc lựa chọn kết hợp cột micro LC và bẫy chọn lọc tương ứng nhằm cải thiện hiệu suất thu hồi dựa trên đặc tính hóa học của chất phân tích. Hình 3 minh họa cho sự cải thiện hiệu suất thu hồi khi thay đổi các bẫy khác nhau trên cùng một cột. Tóm lại, không giống cột bảo vệ, sự kết hợp giữa cột Micro LC và bẫy tương ứng có thể mang lại nhiều lợi ích, trong đó có cải thiện hiệu suất thu hồi.
Tương tự như các cột có đường kính lớn, hiệu năng phân tách của cột Micro LC tùy thuộc vào thành phần hóa học của pha tĩnh. Sự kết hợp của từng cột và bẫy cụ thể mang đến sự khác biệt về hiệu suất thu hồi và hiệu quả phân tách, được thể hiện trên hình 5-6. Trong hình 5, sự kết hợp của cột Kinetex XB-C18 và bẫy MicroTrap Polar mang lại diện tích peak trung bình cao nhất. Tuy nhiên, cột Kinetex XB-C18 kết hợp với bẫy MicroTrap PS cho ra kết quả hình dạng peak và hiệu suất thu hồi tốt nhất, thể hiện qua hình 7. Nghiên cứu này chứng minh được sự khác nhau về hiệu năng khi kết hợp các cột và bẫy với nhau cũng như tác động của sự kết hợp này lên khả năng tối ưu các phương pháp phân tách trên côt micro LC.
Nguồn: Micro LC Columns